峰形反常（包含峰拖尾，前延和裂分等）是高效液相色谱中最常见的问题之一，因而在绝大多数体系适用性试验中都包含峰形的测定，量化的峰形也可以每时每刻被追寻到。

  欠好的峰形会削减附近洗脱出来的峰的别离度（如图1），下降测定的峰面积的精确度和准确度；一起，峰形的改动也是色谱柱开端失效的信号之一。关于色谱剖析人员来说，快速找到反常背面的原因并针对性地处理也是一项重要的专业才能。

  假如色谱图中的峰形均体现相同类型的变形（图2），主体问题发生在剖析物在色谱柱中搬迁之前。

  玻璃料或柱头的空地部分阻塞，此类峰变形最常见的原因是筛板部分阻塞或色谱柱头陷落。

  除非在引荐的pH规模之外运用色谱柱，不然现在的柱子根本不或许会遭到空地的影响。

  可是，筛板阻塞仍然是一个都会存在的问题。关于5μm的色谱柱，进口端的筛板一般具有2.0μm的孔隙度；关于3μm的色谱柱，具有0.5μm的孔隙度。

  假如颗粒物来自于样品，或磨损的泵密封圈或许活动相颗粒物进入色谱，它们一般会集合在筛板上。

  这些颗粒会影响样品在色谱柱进口端的分流，使得部分样品经过不同的活动途径抵达色谱柱，因而会晚于另一部分样品。

  因为此时或此方位未发生别离，因而一切剖析物会以相同的办法被打乱，从而色谱图显现一切峰均具有类似的峰拖尾或变形。

  为了防止这一问题的发生，假如活动相或许含有颗粒（如缓冲沉淀物或尘埃），应对其进行过滤，并在泵密封严峻磨损之前替换新的密封圈。

  假如样品含有颗粒碎片，运用0.5μm微孔滤膜对样品进行过滤或对样品进行5min左右的时间短离心，以去除颗粒。

  强烈建议在自动进样器下流装置0.5μm孔隙度的串联过滤器，以过滤任何意外进入HPLC体系的颗粒物。假如串联过滤器滤片发生阻塞，体系背压会升高；而替换滤片非常简略、快速和经济。选用串联过滤器可明显延伸色谱柱的惯例运用的寿数，而且经济实惠。

  假如峰形解析不正确或是未彻底别离的堆叠峰，或许会被误认为色谱柱或缓冲液的问题。

  图3. 因为存在第二个组分而发生割裂峰。（a）25ng/mL和（b）等离子体中10ng/ mL的药物（第二个峰）（10ng/mL血浆中的药物（第二个峰））

  替换色谱柱不能处理此问题，所以筛板阻塞并非导致这一现象的原因。假如削减色谱柱上样品，如图3(b)，峰形看起来更像是两个峰，而不是一个肩形峰。

  由此进行了进一步的研讨，证明了存在第二个峰。调整办法的条件后，两个峰彻底别离。

  假如在制造商引荐的条件下运用色谱柱，这样的一种状况则很少发生。大多数硅胶柱在pH2-8的规模内能保持安稳。

  假如您需求在此pH规模以外运用操作HPLC体系，请保证挑选在选定条件下会保持安稳的色谱柱。

  这种改动是该办法所特有，常常在前一次剖析完毕后，下一次剖析开端时忽然发生。

  该柱内径为100x2.1mm，柱内填充5μm 粒径的C18填料 。活动相A是10mM碳酸氢铵（pH9.0） ；B是甲醇（MeOH）。

  在这种状况下，所运用的色谱柱活动相pH应远高于引荐的规模，而且无需保护性封端。硅胶在pH为9时会逐步溶解，直到柱床结构不再安稳，而且柱床会发生移动，发生陷落或通道，而这又会导致图4b伸舌峰的构成。

  可以运用较低的活动相pH或选用在较高pH下可以保持安稳状况的色谱柱，以防止这一问题。